引用本文:麦 力,张 冀,刘革力,卜友泉,李 韵,樊建军,宋方洲.人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立[J].重庆医科大学学报,2014,38(3):290~294
人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立
Construction of a recombinant lentivirus expressing MCPH1 and establishment of its stably infected HeLa cell line
DOI:
中文关键词:  慢病毒  MCPH1基因  宫颈肿瘤  单克隆细胞
英文关键词:lentivirus  microcephalin 1 gene  cervical cancer  single clone cells
基金项目:
作者单位
麦 力,张 冀,刘革力,卜友泉,李 韵,樊建军,宋方洲 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心、基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆 400016 
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中文摘要:
      目的:构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装重组慢病毒,滴度测定后,感染HeLa细胞,用有限稀释法筛选稳定的细胞克隆,real-time PCR和Western blot分别检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白水平。结果:经酶切和测序鉴定,成功构建MCPH1重组慢病毒载体,并成功包装慢病毒,滴度为1.24×109 TU/ml;慢病毒感染HeLa细胞后经有限稀释法成功筛选到MCPH1稳定表达细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa;real-time PCR证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株较正常组HeLa(P=0.000)和pLenO-DCE-HeLa组(P=0.000)的MCPH1 mRNA水平显著地增高;Western blot进一步证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株过表达MCPH1。结论:成功构建MCPH1重组慢病毒,并建立了稳定表达MCPH1基因的细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。
英文摘要:
      Molecular Medicine and Cancer Research Center;Teaching and Research Section of Biochemistry and Molecular Biology,College of Basic Medicine,Chongqing Medical University
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